常見問題
答:為了確保BiFC實驗熒光信號的真實性,需要排除假陽性的可能性。假陽性可能是由于熒光蛋白片段的非特異性相互作用或其他非目標蛋白質之間的相互作用引起的。因此,在實驗中應設置對照組,如單獨表達熒光蛋白片段或目標蛋白的對照組,以排除非特異性相互作用的干擾。也可重復實驗,保持每次實驗條件(如細胞類型、培養條件、成像參數等)的一致性,比較蛋白質相互作用結果是否一致;此外,還可以結合其他實驗方法,如免疫共沉淀(Co-IP)、酵母雙雜交(Y2H)、GST pull-down和熒光素酶蛋白互補實驗(LCA)等,以多角度、多層次地驗證蛋白質相互作用的真實存在。
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